2025-07-17 13:08:42
慢病毒大規模純化的捕獲步驟包括:膜過濾澄清,隨后切向流過濾/超濾或者體積排阻色譜濃縮。此外,需用核酸酶(benzonase或M-SAN HQ中鹽核酸酶)來去除細胞殘留的、質粒來源的DNA污染。這兩個步驟順序可以調整,依據項目工藝而定。兩種工藝路線各有優缺點:先用核酸酶消化的優點是可去除大的DNA片段,且后續步驟可以去除殘留核酸酶;但所用的核酸酶的量也非常大。與此相反,將核酸酶步驟后置的優點是大幅降低核酸酶的量(成本降低);但后面的步驟必須有將核酸酶去除的能力。此外,后期用核酸酶的缺點是核酸污染可能會結合慢病毒顆粒形成沉淀,進而導致慢病毒在純化中流失,從而影響得率。ArcticZymes致力于提供高質量產品,中鹽核酸酶具有好的批間一致性、穩定可靠的質量。河北M-SAN HQ中鹽核酸酶70950-150
宿主細胞DNA(HCD)殘留以染色質形式存在,其中有帶負電荷的DNA、帶正電荷及疏水區段的組蛋白,就像膠帶一樣能夠吸附很多物質,包括各種雜蛋白、色譜填料、目的病毒顆粒。非特異吸附雜蛋白,會影響蛋白雜質(如HCP)等的去除;吸附到色譜填料上,會降低色譜分離純化效率;吸附到目的病毒顆粒時,會影響目的產物的穩定性,從而降低目的產物的得率。因此,從生產工藝層面來講,一定要去除HCD,從而能夠簡化工藝、提高目的產物的產量。浙江等滲條件中鹽核酸酶70950-160浙江中鹽核酸酶價格哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。
M-SAN HQ中鹽核酸酶在生理鹽條件下的優勢,讓其成為生物生產工藝中去除核酸污染的更好選擇。經過多年的市場宣傳,M-SAN HQ中鹽核酸酶品質已得到多個全球TOP CDMOs認可,納入其工藝開發篩選平臺。此外,目前全球有10+臨床項目涉及的病毒載體生產用到M-SAN HQ中鹽核酸酶。對于同一個項目,用M-SAN HQ替代Benzonase全能核酸酶,酶量減少、HCD去除效果更優、病毒載體產量也有一定程度的提高,酶相關成本降為原有的1/5以內,極大降低了病毒載體生產成本。
文章作者按照經典的慢病毒載體生產流程操作,在融化、核酸酶消化、澄清、超濾等步驟留樣,分別檢測dsDNA濃度及功能性LV病毒滴度。經過分析發現,——1.dsDNA去除主要發生在澄清環節,能去除dsDNA的80%-90%;2. M-SAN HQ中鹽核酸酶比Benzonase能更高效去除dsDNA,即M-SAN HQ組的TFF回流液中dsDNA殘留量是Benzonase組回流液的20%左右;3. LV病毒滴度在澄清環節損失30%-40%;4. M-SAN HQ組的TFF回流液中LV病毒滴度略高于Benzonase組的回流液數據。衢州中鹽核酸酶價格哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。
在生物工藝流程中,需要使用核酸酶去除終產品中的核酸污染,而核酸酶作為外源成份,也需要在生產流程中去除。核酸酶去除工藝包括熱滅活法、酶抑制劑、離子交換和親合層析法等。慢病毒LV的pI在6.0-6.5左右,包裝了完整基因組DNA后的AAV病毒顆粒PI大致為5.9,來自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右,M-SAN HQ中鹽核酸酶pI 8.7左右。因此,在同樣的條件下,從LV/AAV溶液中去除M-SAN HQ中鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易、更徹底。江蘇中鹽核酸酶服務哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。上海培養基條件中鹽核酸酶70950-160
在已有工藝中,不需做任何調整,用中鹽核酸酶能夠完全替換全能核酸酶,且去除HCD效率更高;河北M-SAN HQ中鹽核酸酶70950-150
細胞基因藥物領域的進展使得對高質量基因轉移技術的需求急劇增加,包括高質量慢病毒載體(LV)的大規模生產。宿主細胞DNA殘留(HCD)是一類主要的工藝相關雜質,對下游純化帶來很大挑戰。根據相關法規要求,需要去除HCD才能達到臨床級LV。HCD去除是通過核酸酶處理聯合下游工藝(DSP)共同實現的。文章作者研究了兩款核酸酶M-SAN HQ中鹽核酸酶(ArcticZymes Technologies)和Benzonase(Merck)對HCD去除效率的差別,其下游工藝包含過濾澄清及TFF超濾。河北M-SAN HQ中鹽核酸酶70950-150