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上海高性價比PEI轉染試劑 歡迎咨詢 上海曼博生物醫藥科技供應

2025-06-30 06:08:48

接種細胞:轉染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養基。Polysciences轉染與遞送相關產品已正式移交KyforaBio,相關產品標簽將變更為KyforaBiobyPolysciences,后續購買請認準備新品牌。PEI轉染試劑是一種陽離子聚合物轉染試劑。上海高性價比PEI轉染試劑

KyforaBiobyPolysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產品,因其較高的轉染效果,已廣泛應用于工業化生產。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳原子,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”體(protonsponge)。PEI可用作轉染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。有實驗證明,分子量為25000的線性PEI即KyforaBiobyPolysciences23966(PEI25K)轉染效率表現優良。請關注我們的公眾號:Mine-bio上海高性價比PEI轉染試劑MAXgene GMP是一種cGMP級PEI轉染試劑。

1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優化。若有更多關于Polysciences 轉染試劑相關技術問題,歡迎咨詢上海曼博生物。歡迎關注曼博生物公眾號:Mine-bio

細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當的完全培養基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養皿上(根據實驗需要選擇培養皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養皿面積的70-90%)。根據細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養基。2、制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管,一管將質粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養基中,輕輕搖動平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育。注:每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻,保證所取的濃度一致。3、培養6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養基,繼續培養,16h左右可以觀測到報告基因的表達。Polysciences PEI轉染試劑中國代理商是哪個?

PEI在于可以應用于體內試驗。當初試驗經費很有限,被逼無奈只能放棄脂質體2000,選擇PEI,以至于相當長的時間內,轉染試驗都不順利。下面是幾點關于PEI轉染的注意要點:1.PEI的使用量可以參照脂質體2000的說明書,所用質粒盡量去內2.轉染時,一定要把PEI+DMEM加入到質粒+DMEM中,順序不可錯,輕微混勻,靜止20min3.轉染后4小時,一定要換液!換含有FBS的完全培養液!因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續試驗涉及到穩定篩選,建議把血清濃度適當提高。PS:事實證明,PEI是可行的,已經做出穩定細胞系了。更多關于PEI轉染試劑相關的信息,可咨詢上海曼博生物醫藥科技有限公司!更多關于Kyfora Bio by Polysciences PEI轉染試劑相關產品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!PEI轉染試劑使用的時候有什么注意事項?上海進口PEI轉染試劑官方代理

PEI轉染試劑主要包括25K和40K的分子量?上海高性價比PEI轉染試劑

抗體藥物研發客戶提供小眾創新產品,包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養基質,轉染試劑、病毒轉導試劑、基因編輯工具等產品和定制服務,支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發從R&D到Clinicaltrial以及后期商業化的無縫轉化;以及提供藥物開發和探索的抗體文庫定制和商業授權靈活的CHO工程細胞株以支持抗體藥物的商業化生產,以此希望幫助國內科研工作者快速地接觸世界范圍內的技術,分享研發工具進步帶來的技術紅利,終為細胞、基因產業以及再生醫學行業等乃至整個生命科學行業賦能!更多關于PEI轉染試劑相關產品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!上海高性價比PEI轉染試劑

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